细胞基因组如何扩增,常见问题有哪些
加入时间:2016-06-14 09:35:29 当前新闻点击率:2963
基因组学已经深刻地改变了生命科学的诸多领域的面貌。目前它的主要内容是新的全基因组碱基序列的测定和在全基因组范围内鉴定那些在不同水平上影响生命活动的基因群的功能和相互作用。为达此要求,近年出现的第二代测序(深度测序)技术和基因芯片技术发挥了关键作用,但是两者都需要足够的高质量的核酸样品。所以,在只有或只能用单细胞或极少量细胞的情况下,如果没有特殊手段,上述分析往往不能常规、方便地进行。单细胞基因组扩增试剂盒能够实现高度均一的全基因组扩增,这种方法是基于多次退火环状循环扩增(MALBAC)技术,该技术首先利用独特的具有链置换活性的DNA聚合酶进行准线性的全基因组预扩增,随后通过PCR进行指数式扩增,为下游分析提供充分的实验材料。那么细胞基因组常见问题有哪些? 常见问题 1.选择的实验材料要新鲜,处理时间不易过长。 2.在加入细胞裂解缓冲液前,细胞必须均匀分散,以减少DNA团块形成。 3. 提取的DNA不易溶解:不纯,含杂质较多;加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥,也将使溶解变得很困难。 4. 电泳检测时DNA成涂布状:操作不慎;污染核酸酶等。 5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8;不纯,含有蛋白质等杂质。在这种情况下,应加入SDS至终浓度为0.5%,并重复步骤2~8。 6.酚/氯仿/异戊醇抽提后,其上清液太黏不易吸取:含高浓度的DNA,可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。 国产品牌普朗医疗生产的全基因组扩增(Whole Genome Amplification)是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术,其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。 采用MDA(多重链置换扩增)的方法,能够在16个小时之内,将ng甚至是pg级的微量DNA有效扩增至10-40μg高覆盖度的全基因组DNA。
(普朗医疗品牌----全基因组扩增试剂盒) 产品优势: 高产量:ng级微量样本经扩增后可获得10-20μg的DNA产物(普通型); pg级微量样本经扩增后可获得30-40μg的DNA产物(高效型); 高覆盖度:微量基因组样本扩增后可达95%以上的覆盖度; 操作简单:单管操作、3步完成、无需纯化、操作时间短; 高保真度:所用的DNA Polymerase具有较高的保真性; 高均一度:基于无偏好性的MDA的扩增,可实现全基因组的均一扩增,扩增产物平均片段长度大于20kb; 设备要求低:只需无热盖的PCR仪或者水浴锅就可完成整个反应。 下游应用: 经本试剂盒扩增后的DNA产物可用于多种下游分析平台 · 基因突变检测 · SNP基因分型 · CNV全景图和非整倍体检测 · 全基因组和外显子测序 · 实时定量PCR · 分子克隆 · 阵列比较基因组杂交 看了上面的介绍,如果你还想了解更多资料和信息,可以免费联系在线客服:400-6656-888进行咨询!(微信号“perlongvip”) 相关阅读: 上一篇:
下一篇:
|