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基因组dna提取方法是什么?有哪些技术要点?
加入时间:2016-07-25 10:16:44  当前新闻点击率:4032

基因组dna提取的原则是必须保证核酸一级结构的完整性,还要排除其它分子(如蛋白质、多糖、脂类、有机溶剂等)的污染,使下游试验顺利进行。那么基因组dna提取方法是什么?有哪些技术要点呢?普朗医疗将为您简单介绍一下。

基因组dna提取方法有很多,像传统的DNA提取与纯化,如CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA;然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,然后用TE 溶解DNA 备用。

另一种基因组dna提取方法是以螯合树脂、特异性 DNA 吸附膜、离子交换纯化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基础 DNA 提取的新方法。这些DNA提取新方法主要应用于提取病毒、微生物、人和动物细胞、包埋组织样品、古生物标本及土壤环境样品 DNA。

基因组dna提取方法

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基因组dna提取相关注意事项:

1.防止内源性DNase,裂解缓冲液中的EDTA使DNA免遭DNase的降解。

2.保证得到高分子量的基因组DNA, 在制备基因组DNA过程中应减少物理机械作用,防止基因组DNA的损伤。

3.保证基因组DNA不被蛋白质所污染,否则将影响限制性内切酶对DNA的酶切作用。

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