DNA测序原理和方法
加入时间:2014-03-03 16:09:18 当前新闻点击率:2705
DNA测序是一项广泛应用于高端体检、产前诊断等领域的技术,影星安吉丽娜·朱莉、苹果公司创始人史蒂夫·乔布斯都曾接受过DNA测序,而前不久两部委却叫停基因测序相关技术及产品,这一举措引发了广泛的社会关注。但是还是有很多人对DNA测序原理和方法都不太明白,为此我们请南京普东兴技术顾问陆主任为大家答疑解惑。
DNA测序方法有很多种,如Sanger双脱氧链终止法、化学降解法、自动化测序法等等。
Sanger双脱氧链终止法原理:测序过程需要先做一个聚合酶连锁反应(PCR)。PCR过程中,双脱氧核糖核苷酸可能随机的被加入到正在合成中的DNA片段里。由于双脱氧核糖核苷酸多脱了一个氧原子,一旦它被加入到DNA链上,这个DNA链就不能继续增加长度。最终的结果是获得所有可能获得的、不同长度的DNA片段。目前最普遍最先进的方法,是将双脱氧核糖核苷酸进行不同荧光标记。将PCR反应获得的总DNA通过毛细管电泳分离,跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下发出荧光。由于ddATP,ddGTP,ddCTP,ddTTP荧光标记不同,计算机可以自动根据颜色判断该位置上碱基究竟是A,T,G,C中的哪一个。
化学修饰法测序原理:将一个DNA片段的5'端磷酸基作放射性标记,再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基,从而产生一系列长度不一而5'端被标记的DNA片段,这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离,再经放射线自显影,确定各片段末端碱基,从而得出目的DNA的碱基序列。
自动化测序法原理:与链终止法测序原理相同,只是用不同的荧光色彩标记ddNTP,如ddATP标记红色荧光,ddCTP标记蓝色荧光,ddGTP标记黄色荧光,ddTTP标记绿色荧光.由于每种ddNTP带有各自特定的荧光颜色,而简化为由1个泳道同时判读4种碱基. |