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通过血液分析仪准确计数血小板的基本方法介绍
加入时间:2011-12-15 09:18:13  当前新闻点击率:4625

    普朗医疗器械公司知识——由于近些年,如何利用血液分析仪对外周血的血小板进行准确计数已经成为了业界的讨论焦点和研究对象。专家也在不断的探究新的方法和计数。然而就目前而言,最为主要和普遍的方法就是免疫学测定法和二维激光散射法。

    1.免疫学测定法

    本法早在1988年即由Aulter提出,但最近几年才深入研究并见诸实用。Dickerhoff(1995)和Matzdorff(1998)应用荧光标记抗血小板膜糖蛋白抗体,用FCM法计数血小板;Davis(1999),Gill(2000)和Harrison(2000)等进一步完善了这一方 法。所用的单抗,早期是抗CD41或CD42b,近来多用抗CD61,三种单抗效果相同。FCM方法都比较复杂,一般是先在流式血球仪上计数着染荧光的血 小板和计数红细胞,先求出血小板/红细胞之比值(下称血小板比率),再用普通血液细胞分析仪计数同一患者的红细胞数。然后以血小板比率×红细胞数=血小板数。 Dickerhoff则改用已知其浓度的荧光微球代替红细胞,先求出血小板/荧光微球之比值,再乘以荧光微球的浓度,即得到血小板数。上述方法都比较麻 烦,荧光微球价格高昂,难以在常规作中推广使用。为此,Gill等改在Abbott公司的CELL-DYN4000型血液分析仪上,直接计数着荧光的血小 板,完全省去FCM法要先求血小板比率的步骤。由于用的是现成的仪器,而一般的血液分析仪,都已有一套成熟的操作、校准和质控系统,故计数结果比较准确, 可用于常规工作。
 
    2.二维激光散射法

    本法是最近几年由Bayer公司研制的Advia 120型血液分析仪首先推出的。其设计原理是:根据同质性球体光散射的Mie理论(Mie theory of light scatter for homogenenous spheres),当球形化的血小板一个一个地通过激光照射区时,在两个角度进行测定:高角度(5°-15°)主要测细胞折射指数(refractive index,简称RI),它与细胞的密度有关:低角度(2°-3°),主要是测细胞的大小。血小的体积在1-30fL,RI在1.35-1.40之间。由 于红细胞含有高浓度的血红蛋白,其折射指数高(Ri可达1.44),故大血小板虽然可能与小红细胞、红细胞碎片、红细胞残骸(ghost)以及其它细胞碎 片的体积相似,但因为容物不同,RI相差较大,因二维散图上可区别并分别计数。此法无需荧光标记的抗体。也没有繁琐的预处理步骤,可以随常规工作与其它血 细胞计数同进进行,使用十分方便。我们已应用于实际工作中,效果甚好。

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