一、通过血细胞分析仪对血小板计数方法的评价与意义

    关于免疫法和二维法这两种方法的准确性，各有关作者均作过详细的实验对比和评价。Harrison等分析了血小板数在4-794×109 /L的87份标本，用FCM（下称免疫学法）计数并与参考（手工）方法和二维激光散射法（用Advia 120型仪器），以及以为基础的仪器等作了对比，结果血小板数>100×109 /L的标本，免疫方法与参考方法和各类均有很好的相关性，相关系数r2=0.98-0.99;但血小板数<100×109 /L的标本，免疫学方法与三种的相关系数r2=0.87，0.90和0.91，而与血液细胞分析仪的相关系数r2仍达0.96。表明在血小板减少的标本，免疫学方法与二维激光散射法有较高的一致性，而与阻抗法相差较大。该作者遇见一份重度的 脂血症标本，用三种阻抗法计数，血小板分别为135、103和193×109 /L，而用免疫法计数，仅为43×109 /L，用血液细胞分析仪为59×109 /L。Gill等在仪器上，以抗 CD61荧光标记法计数血小板，并与一般的光散射法和阻抗法对手工参考方法进行了比较，结果荧光单抗法与参考方法的相关系数r2=0.97，光散射法与参 考方法的相关系数r2=0.94,阻抗法与参考方法的相关系数r2=0.85。在精密度方面，也显示免疫法的优越性。

    Kunicka等对二维激光散射法计数血小板的准确性，也进行了详细的比较和评价。Kunicka等将260份血小板在2-1000×109 /L的血样标本将本法与手工参考方法比较（手工法是由二名有经验的技师各计数一块血细胞计数板的两个计数室，以总平均数报告），其相关系数 r2=0.975；而与 一维法（即和一般 的光散射法）的相关系数r2=0.886。值得指出的是，在重度贫血、白血病、MDS、DIC和各种血小板减少的病例，经常出现NPPs，手工法和各种一 维法计数结果往往偏高。Kunicka等出了100份血小板低于50×109/L的血样，将二维法与手工法进行比较，结果相关系数r2=0.833，远低 于血小板数正常的标本。Chapman等用Advia 120 的二维仪器计数血小板，认为它有很高的准确性，可减少65%的人工复查率（review rate ）,从而节省了可观的经费。
    除了各种非血小板颗粒的存在，使血小板计数偏高以外，大血小板和血小板聚集（clump）的存在，是导致阻抗法和一般光学法计数偏 低的主要原因。它们往往因为体积过大而被当作红（白）细胞加以计数。在染色的血涂片上，由血球仪研究：一般正常血小板的直径在1-4μm，Gill等将血涂片上的大型血 小板，分为大血小板（macrolpatelet,直径4-6μm）和巨血小板（giantplatelet,直径6μm以上）两类，在Advia 120仪上，将体积在20fL以上者，定为大血小板，并报告其数量。关于大血小板的参考值及临床义，目前报道尚少，值得进一步研究。

    二、存在的问题

    尽管免疫法和二维法有很多优点，但还不能说已尽善尽美。

    免疫法  无论是FCM还是用CELL-DYN仪计数，都要用昂贵的荧光标记单抗和高档的血液分析仪器，以及较繁琐的前处理，故仅适用于特殊的病例或用于方法和校准仪器，难 以在常规工作中普遍推广。此外，有些血小板膜糖蛋白先天缺陷的患者（如Glanzmann 血小板无力症），因膜上不表达CD61等抗原，就不能用免疫法计数。

    二维法  尽管它不需特殊试剂和仪器，对NPPs特别是对大血小板的分辨力强，但对白细胞碎片与血小板的鉴别能力如何，尚研究不够。这些碎片，大小可能与血小板相 似，但折射率是否像红细胞样有区别还不太清楚。此外，本法区分聚集的血小板的能力，显然不及免疫法。由于血小板聚集过程需要钙离子，因此用除钙的抗凝剂抗 凝分混匀血液（和制血涂片），一般不会出现血小板聚集。但应注意有极少数的人的血小板，在用EDTA抗凝时，反充会出现聚集。这种依赖EDTA的血小板聚 集现象，有人称其为“EDTA聚集者（EDTA Clumper）”,此时只能换用非EDTA抗凝剂（如枸橼酸钠）进行计数。通常所谓的血小板聚集，是指血小板与血小板之间互相粘附，此时一般血液分析仪 会将其误认作红、白细胞而加以计数，导致血小板计数偏低。另有一种现象是血小板粘附于白细胞上，称为”血小板卫星现象（platelet satellitism）”,亦会使血小板假性偏低。

    间接法  目前用于评价血小板计数准确性的“参考方法”是手工法，其本身不但精密度较差，而且在镜下也往往难以准确辨别血小板与某些NPPs，准确性也不够高，但又 没有可代替的更好的方法。为了验证和比较各种方法的准确性，Kunicka等提出，增加一项在血涂片上间接计数血小板的方法作为补充。该法是用抗凝血液推 一血片，经氏染色后，在厚薄适中处计数1000个红细胞并同时计数所见到的血小板，求得血小板/红细胞之比值。再将此比值×红细胞数（通过一般血细胞分析仪数得），求得血小板数。此法虽不十分精确，但可以从另一侧面，直观地“间接”计数血小板，还可观察血小板的大小、形态、有无聚集及聚集体大小等等，是一种 简单、易行的方法。

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